Detección mejorada del antigeno CD2 por un ultramicrométodo inmunocitoquimico en células T no-deshidratadas unidas a láminas recubiertas con poli-L-lisina y fijadas con vapores de formaldehido

Fragmento

Al Director: La determinación de subpoblaciones linfocitarias se puede realizar por métodos de inmunofluorescencia e inmunocitoquímica. En nuestro labora torio se introdujo una modificación en el método inmunocitoquímico desarrollado por Kranz y Thierfelder que se utiliza para el inmunofenotipaje celular en el diagnóstico inmunológico de leucemias y linfomas y para la evaluación de estados de inmunodeficiencia incluyendo el diagnóstico ampliado del SIDA. El procedimiento original combina el uso de células con carga eléctrica negativa unidas electrostáticamente a láminas con múltiples sitios de reacción recubiertos con poli-L-lisina (PLL) con carga positiva, seguido de una reacción inmunocitoquímica muy sensible, en que se emplean anticuerpos y 2 antisueros conjugados con peroxidasa. En este método están presentes varias ventajas prácticas, de las cuales las más importantes son: la aplicación de anticuerpos policlonales o monoclonales en diluciones mayores que las realizadas para la inmunofluorescencia, la posibilidad de determinar múltiples reacciones antíge no-anticuerpo en una misma lámina portaobjeto (hasta 21 determinaciones), la evaluación simultánea de la morfología celular y el marcaje inmunológico con el uso de la microscopia de luz visible, la posibilidad de estudiar antígenos intracitoplasmáticos e intranucleares, y la utilización de concentraciones celulares 20 a 40 veces menores que las usadas en la inmunofluorescencia indirecta, lo que permite el análisis inmunológico diferencial aun en muestras con poca celularidad. Kranz y Thierfelder usaron la fijación con glutaraldehído (GA) (0,05% de GA, grado 1, Sigma, a 20ºC durante 7 minutos) lo que permite una preservación adecuada de los antígenos de membrana, superior a la lograda con el uso de acetona, metanol y etanol acidificado, pero con el inconveniente de una pobre sensibilidad para la detección de algunos antígenos de la superficie celular, como el CD2.

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2004-04-27   |   631 visitas   |   Evalua este artículo 0 valoraciones

Vol. 11 Núm.1. Enero-Junio 1995 Pags. . Rev Cubana Hematol Inmunol Hemoter 1995; 11(1)