Resumen

Antecedentes: Los organismos vivos responden al estrés aumentando la síntesis de proteínas. El estrés por choque térmico ha sido el más estudiado y las proteínas que se inducen, se han denominado genéricamente como proteínas de choque térmico. Objetivo: En este trabajo se establecieron las condiciones óptimas de producción de la proteína HSC70, expresada en E. coli BL21 (DE3) y de los anticuerpos policlonales que permitan identificarla. Material y métodos: Mediante varios ensayos se establecieron las concentraciones óptimas del agente inductor isopropil-b-D-thiogalactopiranosido (PTG), del inóculo bacteriano, de empleo de los plásmidos de expresión pET-3a y pET-28a (+); y el método más eficiente para la recuperación de las formas soluble o insoluble de la proteína y de anticuerpos policlonales que la identifiquen. Resultados: Encontramos que el inóculo de cinco colonias con IPTG (2mM) en tubos con cinco mililitros de medio modificado e incubadas por 24 horas a 37°C con agitación constante (200 r.p.m) y tratamiento de sonicación, produce el mejor rendimiento de HSC70. La calidad de la proteína inducida se estableció mediante “Western blotting”. Conclusión: La proteína recombinante así obtenida permitió, generar anticuerpos policlonales que a su vez permiten detectar la proteína HSC70 natural en la membrana citoplasmática de diferentes células por inmunofluorescencia, en ELISA, en Western Blot y en pruebas de bloqueo de infección de rotavirus.

Palabras clave: Formación de anticuerpos proteínas de choque térmico HSC70 Escherichia coli.

2006-12-08   |   2,034 visitas   |   1 valoraciones

Vol. 54 Núm.3. Julio-Septiembre 2006 Pags. 156-168 Rev Fac Med Univ Nac Colomb 2006; 54(3)