Resumen

Objetivo. Obtener anticuerpos monoclonales de ratón contra la proteasas de cisteína 5 (EhCP5) de Entamoeba histolytica. Materiales y métodos. Se inmunizaron ratones BALB/c por vía intraperitoneal con adyuvante de Freund completo e incompleto con la proteína recombinante EhCP5 obtenida a partir del cultivo de E.coli DH5a trasfectada con el vector recombinante pJC45 que expresa dicha proteína. Se seleccionó el animal con mejor respuesta de anticuerpos. Al cual se le extrajo su bazo como fuente de linfocitos B, los cuales se fusionaron utilizando PEG con células de mieloma de ratón SP2-0/Ag14. Se procedió a selección de los hibridomas y a la evaluación de los sobrenadantes de las colonias que crecieron a los 7 días mediante ELISA. Los hibridomas con valores más altos de anticuerpos específicoscontra la proteína EhCP5r se seleccionaron, y los clones obtenidos por diluciones limitantes fueron expandidos. Resultados. A partir de un clon secretor estable se purificoel anticuerpo monoclonal anti EhCP5r del isotipo IgG1 por cromatografía de afinidadcon proteína G. Los clones fueron expandidos in vivo e in vitro. Con el anticuerpo purificadose diseñaron tres sistemas de captura para evaluar la aplicabilidad del anticuerpo monoclonal anti EhCP5r como método inmunodiagnóstico. Conclusiones. Se logro la producción de un anticuerpo monoclonal específicocontra EhCP5r que permite diferenciar Entamoeba histolytica de Entamoeba dispar.

Palabras clave: Anticuerpo Entamoeba histolytica hibridoma proteasas de cisteína monoclonal prueba ELISA (Fuentes:CAB DeCS).

2013-04-17   |   436 visitas   |   Evalua este artículo 0 valoraciones

Vol. 17 Núm.2. Mayo-Agosto 2012 Pags. 3014-3023 Rev MVZ Córdoba 2012; 17(2)