Cloning and expression of a recombinant CagA-gene fragment of Helicobacter pylori and its preliminary evaluation in serodiagnosis

Autores: González López Lidice, Marrero Karen, Reyes Zamora Orlando, Rodríguez Elaine, Martínez Liudmila, Rodríguez González Boris Luis

Resumen

Clonación y expresión de un fragmento recombinante del gen cagA de Helicobacter pylori y su evaluación preliminar en el serodiagnóstico Introducción: Las cepas de Helicobacter pylori que expresan la citotoxina CagA, se asocian más frecuentemente con úlcera péptica, gastritis atrófica y adenocarcinoma gástrico que las que carecen de esta citotoxina. Por lo anterior, el determinar la presencia de anticuerpos anti-CagA adquiere gran importancia clínica en la detección serológica de la infección por H. pylori y la predicción del riesgo de enfermedades. Sin embargo, los métodos serológicos que emplean CagA han sido cuestionados debido a las diferencias encontradas en las evaluaciones de su desempeño en diversas poblaciones. Objetivo: Obtener un fragmento recombinante de la proteína CagA para el serodiagnóstico de la infección por H. pylori. Materiales y métodos: Un fragmento del gen cagA fue clonado en un vector de expresión procariota que contenía el promotor de la T7 ARN polimerasa. El fragmento de la proteína CagA con seis histidinas en la región C-terminal, se expresó, se solubilizó con urea y se purificó por cromatografía de afinidad con iones metálicos inmovilizados. El desempeño de la proteína recombinante se evaluó empleando un método in house de Western Blot y 180 sueros humanos. Los resultados se compararon con la prueba de referencia Helicoblot 2.1. Resultados: La proteína CagA expresada mostró una banda inmunorreactiva de 80 kDa en el Western Blot al emplear dos anticuerpos policlonales anti-CagA específicos. La proteína recombinante fue purificada hasta un 93% de pureza y el análisis de desempeño del antígeno recombinante purificado mostró buena inmunorreacción y exhibió valores de sensibilidad, especificidad y exactitud de 88,1%, 100% y 92,7%, respectivamente. Conclusiones: El fragmento de la proteína CagA del estudio puede constituir una herramienta útil para el diagnóstico serológico de la infección por cepas de H. pylori positivas para CagA.

Palabras clave: Helicobacter pylori pruebas serológicas.

2013-06-10   |   952 visitas   |   Evalua este artículo 0 valoraciones

Vol. 33 Núm.4. Octubre-Diciembre 2013 Pags. 546-553 Biomédica 2013; 33(4)